Fas-induced caspase denitrosylation

Science

Volumn 284, Issue 5414, 1999, Pages 651-654

  Mannick, Joan B ^a   Hausladen, Alfred ^b   Liu, Limin ^c   Hess, Douglas T ^b   Zeng, Ming ^b   Miao, Qian X ^a   Kane, Laurie S ^b   Gow, Andrew J ^b   Stamler, Jonathan S ^b,c  

^a DANA FARBER CANCER INSTITUTE   (United States)

^b DUKE UNIVERSITY SCHOOL OF MEDICINE   (United States)

^c DUKE UNIVERSITY MEDICAL CENTER   (United States)

Author keywords

[No Author keywords available]

Indexed keywords

CASPASE; ENZYME PRECURSOR; FAS ANTIGEN;

APOPTOSIS; ARTICLE; B LYMPHOCYTE; CATALYSIS; CONCENTRATION (PARAMETERS); ENZYME ACTIVE SITE; ENZYME ACTIVITY; GENE ACTIVATION; HUMAN; HUMAN CELL; PRIORITY JOURNAL; PROTEIN DEGRADATION; PROTEIN PROCESSING; SIGNAL TRANSDUCTION; T LYMPHOCYTE;

ANIMALS; ANTIGENS, CD95; APOPTOSIS; BINDING SITES; CASPASE 3; CASPASES; CELL LINE; CYSTEINE; ENZYME ACTIVATION; ENZYME INHIBITORS; ENZYME PRECURSORS; HUMANS; MERCAPTOETHANOL; NITRIC OXIDE; NITRIC OXIDE SYNTHASE; NITRITES; NITROSO COMPOUNDS; OMEGA-N-METHYLARGININE; S-NITROSOTHIOLS; SIGNAL TRANSDUCTION;

EID: 0033597449     PISSN: 00368075     EISSN: None     Source Type: Journal    
DOI: 10.1126/science.284.5414.651     Document Type: Article

References (44)

1. J. B. Mannick, K. Asano, K. Izumi, E. Kieff, J. S. Stamler, Cell 79, 1137 (1994); A. M. Genaro, S. Hortelano, A. Alvarez, C. Martinez, L. Bosca, J. Clin. Invest. 95, 1884 (1995); S. Y. Chun, K. M. Eisenhauer, M. Kubo, A. J. W. Hsueh, Endocrinology 136, 3120 (1995); F. Beauvais, M. Laurence, L. Dubertret, FEBS Lett. 361, 229 (1995); J. B. Mannick, X. Q. Miao, J. S. Stamler, J. Biol. Chem. 272, 24124 (1997); A. Estevez et al., J. Neurosci. 18, 3708 (1998); S. Dimmeter, J. Haendeler, A. Sause, A. M. Zeiher, Cell Growth Differ. 9, 415 (1998).
2. J. B. Mannick, K. Asano, K. Izumi, E. Kieff, J. S. Stamler, Cell 79, 1137 (1994); A. M. Genaro, S. Hortelano, A. Alvarez, C. Martinez, L. Bosca, J. Clin. Invest. 95, 1884 (1995); S. Y. Chun, K. M. Eisenhauer, M. Kubo, A. J. W. Hsueh, Endocrinology 136, 3120 (1995); F. Beauvais, M. Laurence, L. Dubertret, FEBS Lett. 361, 229 (1995); J. B. Mannick, X. Q. Miao, J. S. Stamler, J. Biol. Chem. 272, 24124 (1997); A. Estevez et al., J. Neurosci. 18, 3708 (1998); S. Dimmeter, J. Haendeler, A. Sause, A. M. Zeiher, Cell Growth Differ. 9, 415 (1998).
3. J. B. Mannick, K. Asano, K. Izumi, E. Kieff, J. S. Stamler, Cell 79, 1137 (1994); A. M. Genaro, S. Hortelano, A. Alvarez, C. Martinez, L. Bosca, J. Clin. Invest. 95, 1884 (1995); S. Y. Chun, K. M. Eisenhauer, M. Kubo, A. J. W. Hsueh, Endocrinology 136, 3120 (1995); F. Beauvais, M. Laurence, L. Dubertret, FEBS Lett. 361, 229 (1995); J. B. Mannick, X. Q. Miao, J. S. Stamler, J. Biol. Chem. 272, 24124 (1997); A. Estevez et al., J. Neurosci. 18, 3708 (1998); S. Dimmeter, J. Haendeler, A. Sause, A. M. Zeiher, Cell Growth Differ. 9, 415 (1998).
4. J. B. Mannick, K. Asano, K. Izumi, E. Kieff, J. S. Stamler, Cell 79, 1137 (1994); A. M. Genaro, S. Hortelano, A. Alvarez, C. Martinez, L. Bosca, J. Clin. Invest. 95, 1884 (1995); S. Y. Chun, K. M. Eisenhauer, M. Kubo, A. J. W. Hsueh, Endocrinology 136, 3120 (1995); F. Beauvais, M. Laurence, L. Dubertret, FEBS Lett. 361, 229 (1995); J. B. Mannick, X. Q. Miao, J. S. Stamler, J. Biol. Chem. 272, 24124 (1997); A. Estevez et al., J. Neurosci. 18, 3708 (1998); S. Dimmeter, J. Haendeler, A. Sause, A. M. Zeiher, Cell Growth Differ. 9, 415 (1998).
5. J. B. Mannick, K. Asano, K. Izumi, E. Kieff, J. S. Stamler, Cell 79, 1137 (1994); A. M. Genaro, S. Hortelano, A. Alvarez, C. Martinez, L. Bosca, J. Clin. Invest. 95, 1884 (1995); S. Y. Chun, K. M. Eisenhauer, M. Kubo, A. J. W. Hsueh, Endocrinology 136, 3120 (1995); F. Beauvais, M. Laurence, L. Dubertret, FEBS Lett. 361, 229 (1995); J. B. Mannick, X. Q. Miao, J. S. Stamler, J. Biol. Chem. 272, 24124 (1997); A. Estevez et al., J. Neurosci. 18, 3708 (1998); S. Dimmeter, J. Haendeler, A. Sause, A. M. Zeiher, Cell Growth Differ. 9, 415 (1998).
6. J. B. Mannick, K. Asano, K. Izumi, E. Kieff, J. S. Stamler, Cell 79, 1137 (1994); A. M. Genaro, S. Hortelano, A. Alvarez, C. Martinez, L. Bosca, J. Clin. Invest. 95, 1884 (1995); S. Y. Chun, K. M. Eisenhauer, M. Kubo, A. J. W. Hsueh, Endocrinology 136, 3120 (1995); F. Beauvais, M. Laurence, L. Dubertret, FEBS Lett. 361, 229 (1995); J. B. Mannick, X. Q. Miao, J. S. Stamler, J. Biol. Chem. 272, 24124 (1997); A. Estevez et al., J. Neurosci. 18, 3708 (1998); S. Dimmeter, J. Haendeler, A. Sause, A. M. Zeiher, Cell Growth Differ. 9, 415 (1998).
7. J. B. Mannick, K. Asano, K. Izumi, E. Kieff, J. S. Stamler, Cell 79, 1137 (1994); A. M. Genaro, S. Hortelano, A. Alvarez, C. Martinez, L. Bosca, J. Clin. Invest. 95, 1884 (1995); S. Y. Chun, K. M. Eisenhauer, M. Kubo, A. J. W. Hsueh, Endocrinology 136, 3120 (1995); F. Beauvais, M. Laurence, L. Dubertret, FEBS Lett. 361, 229 (1995); J. B. Mannick, X. Q. Miao, J. S. Stamler, J. Biol. Chem. 272, 24124 (1997); A. Estevez et al., J. Neurosci. 18, 3708 (1998); S. Dimmeter, J. Haendeler, A. Sause, A. M. Zeiher, Cell Growth Differ. 9, 415 (1998).
8. S. Dimmeler, J. Haendeler, M. Nehls, A. Zeiher, J. Exp. Med. 185, 601 (1997); L. Rossig et al., J. Biol. Chem. 274, 6823 (1999).
9. S. Dimmeler, J. Haendeler, M. Nehls, A. Zeiher, J. Exp. Med. 185, 601 (1997); L. Rossig et al., J. Biol. Chem. 274, 6823 (1999).
10. Y. M. Kim, R. V. Talanian, T. R. Billiar, J. Biol. Chem. 272, 31138 (1997); G. D. Geneviva et al., Am. J. Physiol. 275, L717 (1998).
11. Y. M. Kim, R. V. Talanian, T. R. Billiar, J. Biol. Chem. 272, 31138 (1997); G. D. Geneviva et al., Am. J. Physiol. 275, L717 (1998).
12. G. Melino et al., Nature 388, 432 (1997); J. Li, T. R. Billiar, R. V. Talanian, Y. M. Kim, Biochem. Biophys. Res. Commun. 240, 419 (1997); S. Mohr, B. Zech, E. G. Lapetina, B. Brune, ibid. 238, 387 (1997); T. Ogura, M. Tatemichi, H. Esumi, ibid. 236, 365 (1997); L. Tenneti, D. M. D'Emilia, S. A. Lipton, Neurosci. Lett. 236, 139 (1997).
13. G. Melino et al., Nature 388, 432 (1997); J. Li, T. R. Billiar, R. V. Talanian, Y. M. Kim, Biochem. Biophys. Res. Commun. 240, 419 (1997); S. Mohr, B. Zech, E. G. Lapetina, B. Brune, ibid. 238, 387 (1997); T. Ogura, M. Tatemichi, H. Esumi, ibid. 236, 365 (1997); L. Tenneti, D. M. D'Emilia, S. A. Lipton, Neurosci. Lett. 236, 139 (1997).
14. G. Melino et al., Nature 388, 432 (1997); J. Li, T. R. Billiar, R. V. Talanian, Y. M. Kim, Biochem. Biophys. Res. Commun. 240, 419 (1997); S. Mohr, B. Zech, E. G. Lapetina, B. Brune, ibid. 238, 387 (1997); T. Ogura, M. Tatemichi, H. Esumi, ibid. 236, 365 (1997); L. Tenneti, D. M. D'Emilia, S. A. Lipton, Neurosci. Lett. 236, 139 (1997).
15. G. Melino et al., Nature 388, 432 (1997); J. Li, T. R. Billiar, R. V. Talanian, Y. M. Kim, Biochem. Biophys. Res. Commun. 240, 419 (1997); S. Mohr, B. Zech, E. G. Lapetina, B. Brune, ibid. 238, 387 (1997); T. Ogura, M. Tatemichi, H. Esumi, ibid. 236, 365 (1997); L. Tenneti, D. M. D'Emilia, S. A. Lipton, Neurosci. Lett. 236, 139 (1997).
16. G. Melino et al., Nature 388, 432 (1997); J. Li, T. R. Billiar, R. V. Talanian, Y. M. Kim, Biochem. Biophys. Res. Commun. 240, 419 (1997); S. Mohr, B. Zech, E. G. Lapetina, B. Brune, ibid. 238, 387 (1997); T. Ogura, M. Tatemichi, H. Esumi, ibid. 236, 365 (1997); L. Tenneti, D. M. D'Emilia, S. A. Lipton, Neurosci. Lett. 236, 139 (1997).
17. 2 = 0.03). In addition, we adapted a methodology designed to exclude the possibility of artifactual S-nitrosylation by blocking free thiols in caspase-3 immunoprecipitates with 1 mM N-ethyl-maleimide (NEM), included in wash buffers preceeding elution. Prior exposure to NEM completely blocked NO donor (pH 8)-or nitrite (0.5 N HCl)-mediated S-nitrosylation of recombinant caspase-3 or procaspase-3. Although NEM modestly reduced the NO signal derived from immunoprecipitated caspase-3 (∼25%, n = 7), it also reduced by a similar amount the NO signal from highly pure SNO-caspase-3 [0.5 M NaCl, 1% NP-40, 50 mM tris (pH 8), 0.1 mM EDTA] that had been synthesized in vitro. Thus, this approach demonstrated that caspase-3 was S-nitrosylated intracellularly. For protein immunoblot analysis, whole-cell lysates or immunoprecipitated proteins were separated on 7% (NOS) or 12% (caspase-3) polyacrylamide gels, transferred to nitro-cellulose, and incubated with 250 ng/ml of anti-caspase-3 monoclonal antibody, anti-nNOS monoclonal antibody, or anti-iNOS polyclonal antibody (Transduction Labs), or a 1:1,000 dilution of anti-caspase-3 rabbit polyclonal antibody (Pharmingen), followed by a 1:1000 dilution of secondary horseradish peroxidase antibody (Amersham), and then were developed by ECL (Amersham).
18. C. A. Boulakia et al., Oncogens 12, 529 (1996).
19. 2. The photolysis and chemical reduction assays are linear to 1 pmol for SNO and nitrite, respectively, and can differentiate 1 pmol from zero (deionized water). S-Nitrosylated recombinant caspase-3 standards were detected by both methods; the standard curves for SNO-caspase-3 and GSNO were superimposeable in the photolysis assay. The chemical reduction method has not been extensively validated for SNO and thus was only used qualitatively to verify results from photolysis.
20. J. B. Mannick, A. Hausladen, L. Liu, A. Cow, J. S. Stamler, data not shown.
21. A. Srinivasan et al., J. Biol. Chem. 273, 4523 (1998).
22. P. Li et al., Cell 91, 479 (1997).
23. 7 MCF-7 cells to 75% confluence in T150 flasks containing Dulbecco's modified Eagle's medium supplemented with 10% FBS (Gemini), 2 mM gkitamine (Cellgro), 100 U/ml penicillin and 100 μg/ml streptomycin (Gibco-BRL). The cells were then either transiently transfected with 120 μg of plasmids - engineered to express either wild-type or mutant procaspase-3 in which cysteine-163 was mutated to alanine (9), using lipofectAMINE per the manufacturer's protocol (life Technologies) - or further treated with G418 to select for stable clones. The coding sequence of each expression construct was sequenced in its entirety before use. The cells were lysed in NP-40 buffer (48 hours following transient transfection), and caspase-3 immunoprecipitations were done as above. The level of wild-type and mutant caspase-3 in the lysates and immunoprecipitates was determined by protein immunoblot or silver stain analysis.
24. Fas was cross-linked on the surface of cells with 50 ng/ml of anti-Fas IgM clone CH-11 (Upstate Biotech) for 5 min to 2 hours at 37°C. The cells were then washed at 4°C with phosphate-buffered saline (PBS), and immunoprecipitations were done at selected intervals (6).
25. Cells were grown for 2, 24, or 48 hours in the presence or absence of the NO synthase inhibitor L-NMA (5 mM versus 1 mM L-arginine in the medium) (Calbiochem). The cells were then washed, and immunoprecipitations were done (6).
26. 7 10C9 or Jurkat cells for 24 to 48 hours in the presence or absence of L-NMA as described above. Fas agonist antibody (100 ng/ml, clone CH-11, Upstate Biotech) and S-nitrosopenicillamine (500 μM) were then added to the appropriate cultures for 50 to 75 min, after which the cells were washed with ice-cold PBS and resuspended in 140 μl of buffer A [100 mM Hepes (pH 7.4), 140 mM NaCl, 0.5 mM phenylmethylsulfonyl fluoride, 5 μg/ml aprotinin, and 10 μg/ml leupeptin]. The cells were then lysed with three cycles of freezing and thawing, and the crude cytosol was obtained by centrifugation at 12,000g for 20 min at 4°C. We mixed 50 to 200 μg of cytosolic protein with 400 μM Ac-DEVD-pNA (Quality Biochemicals) in 150 μl of buffer B [100 mM Hepes (pH 7.4), 20% glycerol, and protease inhibitors] and incubated it at 37°C. The caspase-3-like activity was calculated by measuring the increased absorbence at 405 nm every 10 min. The reaction mixture without cell lysate or substrate was used as a control.
27. J. S. Stamler et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 89, 8087 (1992); L. Molina y Vedia et al., J. Biol. Chem. 267, 24929 (1992); J. S. Stamler et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 89, 444 (1992); S. A. Lipton et al., Nature 364, 626 (1993); R. Gopalakrishna, Z. H. Chen, U. Gundimeda, J. Biol. Chem. 268, 27180 (1993); H. M. Lander, J. S. Ogiste, S. F. Pearce, R. Levi, A. Novogrodsky, ibid. 270, 7017 (1995); J. S. Stamler, Cell 78, 931 (1994); A. Hausladen, C. T. Privalle, T. Keng, J. DeAngelo, J. S. Stamler, ibid. 86, 719 (1996); D. Nikitovic, A. Holmgren, G. Spyrou, Biochem. Biophys. Res. Commun. 242, 109 (1998); H. S. So et al., ibid. 247, 809 (1998); L. Xu, J. P. Eu, G. Meissner, J. S. Stamler, Science 279, 234 (1998); H. Y. Yun, M. Gonzalez-Zulueta, V. L. Dawson, T. M. Dawson, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 95, 5773 (1998); Z. Li et al., Neuron 20, 1039 (1998); G. M. Buga, L. H. Wei, P. M. Bauer, J. M. Fukuto, L. J. Ignarro, Am. J. Physiol. 275, R1256 (1998); E. Clementi, G. C. Brown, M. Feelisch, S. Moncada, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 95, 7631 (1998); M. Saura et al., Immunity 10, 21 (1999).
28. J. S. Stamler et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 89, 8087 (1992); L. Molina y Vedia et al., J. Biol. Chem. 267, 24929 (1992); J. S. Stamler et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 89, 444 (1992); S. A. Lipton et al., Nature 364, 626 (1993); R. Gopalakrishna, Z. H. Chen, U. Gundimeda, J. Biol. Chem. 268, 27180 (1993); H. M. Lander, J. S. Ogiste, S. F. Pearce, R. Levi, A. Novogrodsky, ibid. 270, 7017 (1995); J. S. Stamler, Cell 78, 931 (1994); A. Hausladen, C. T. Privalle, T. Keng, J. DeAngelo, J. S. Stamler, ibid. 86, 719 (1996); D. Nikitovic, A. Holmgren, G. Spyrou, Biochem. Biophys. Res. Commun. 242, 109 (1998); H. S. So et al., ibid. 247, 809 (1998); L. Xu, J. P. Eu, G. Meissner, J. S. Stamler, Science 279, 234 (1998); H. Y. Yun, M. Gonzalez-Zulueta, V. L. Dawson, T. M. Dawson, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 95, 5773 (1998); Z. Li et al., Neuron 20, 1039 (1998); G. M. Buga, L. H. Wei, P. M. Bauer, J. M. Fukuto, L. J. Ignarro, Am. J. Physiol. 275, R1256 (1998); E. Clementi, G. C. Brown, M. Feelisch, S. Moncada, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 95, 7631 (1998); M. Saura et al., Immunity 10, 21 (1999).
29. J. S. Stamler et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 89, 8087 (1992); L. Molina y Vedia et al., J. Biol. Chem. 267, 24929 (1992); J. S. Stamler et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 89, 444 (1992); S. A. Lipton et al., Nature 364, 626 (1993); R. Gopalakrishna, Z. H. Chen, U. Gundimeda, J. Biol. Chem. 268, 27180 (1993); H. M. Lander, J. S. Ogiste, S. F. Pearce, R. Levi, A. Novogrodsky, ibid. 270, 7017 (1995); J. S. Stamler, Cell 78, 931 (1994); A. Hausladen, C. T. Privalle, T. Keng, J. DeAngelo, J. S. Stamler, ibid. 86, 719 (1996); D. Nikitovic, A. Holmgren, G. Spyrou, Biochem. Biophys. Res. Commun. 242, 109 (1998); H. S. So et al., ibid. 247, 809 (1998); L. Xu, J. P. Eu, G. Meissner, J. S. Stamler, Science 279, 234 (1998); H. Y. Yun, M. Gonzalez-Zulueta, V. L. Dawson, T. M. Dawson, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 95, 5773 (1998); Z. Li et al., Neuron 20, 1039 (1998); G. M. Buga, L. H. Wei, P. M. Bauer, J. M. Fukuto, L. J. Ignarro, Am. J. Physiol. 275, R1256 (1998); E. Clementi, G. C. Brown, M. Feelisch, S. Moncada, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 95, 7631 (1998); M. Saura et al., Immunity 10, 21 (1999).
30. J. S. Stamler et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 89, 8087 (1992); L. Molina y Vedia et al., J. Biol. Chem. 267, 24929 (1992); J. S. Stamler et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 89, 444 (1992); S. A. Lipton et al., Nature 364, 626 (1993); R. Gopalakrishna, Z. H. Chen, U. Gundimeda, J. Biol. Chem. 268, 27180 (1993); H. M. Lander, J. S. Ogiste, S. F. Pearce, R. Levi, A. Novogrodsky, ibid. 270, 7017 (1995); J. S. Stamler, Cell 78, 931 (1994); A. Hausladen, C. T. Privalle, T. Keng, J. DeAngelo, J. S. Stamler, ibid. 86, 719 (1996); D. Nikitovic, A. Holmgren, G. Spyrou, Biochem. Biophys. Res. Commun. 242, 109 (1998); H. S. So et al., ibid. 247, 809 (1998); L. Xu, J. P. Eu, G. Meissner, J. S. Stamler, Science 279, 234 (1998); H. Y. Yun, M. Gonzalez-Zulueta, V. L. Dawson, T. M. Dawson, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 95, 5773 (1998); Z. Li et al., Neuron 20, 1039 (1998); G. M. Buga, L. H. Wei, P. M. Bauer, J. M. Fukuto, L. J. Ignarro, Am. J. Physiol. 275, R1256 (1998); E. Clementi, G. C. Brown, M. Feelisch, S. Moncada, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 95, 7631 (1998); M. Saura et al., Immunity 10, 21 (1999).
31. J. S. Stamler et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 89, 8087 (1992); L. Molina y Vedia et al., J. Biol. Chem. 267, 24929 (1992); J. S. Stamler et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 89, 444 (1992); S. A. Lipton et al., Nature 364, 626 (1993); R. Gopalakrishna, Z. H. Chen, U. Gundimeda, J. Biol. Chem. 268, 27180 (1993); H. M. Lander, J. S. Ogiste, S. F. Pearce, R. Levi, A. Novogrodsky, ibid. 270, 7017 (1995); J. S. Stamler, Cell 78, 931 (1994); A. Hausladen, C. T. Privalle, T. Keng, J. DeAngelo, J. S. Stamler, ibid. 86, 719 (1996); D. Nikitovic, A. Holmgren, G. Spyrou, Biochem. Biophys. Res. Commun. 242, 109 (1998); H. S. So et al., ibid. 247, 809 (1998); L. Xu, J. P. Eu, G. Meissner, J. S. Stamler, Science 279, 234 (1998); H. Y. Yun, M. Gonzalez-Zulueta, V. L. Dawson, T. M. Dawson, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 95, 5773 (1998); Z. Li et al., Neuron 20, 1039 (1998); G. M. Buga, L. H. Wei, P. M. Bauer, J. M. Fukuto, L. J. Ignarro, Am. J. Physiol. 275, R1256 (1998); E. Clementi, G. C. Brown, M. Feelisch, S. Moncada, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 95, 7631 (1998); M. Saura et al., Immunity 10, 21 (1999).
32. J. S. Stamler et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 89, 8087 (1992); L. Molina y Vedia et al., J. Biol. Chem. 267, 24929 (1992); J. S. Stamler et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 89, 444 (1992); S. A. Lipton et al., Nature 364, 626 (1993); R. Gopalakrishna, Z. H. Chen, U. Gundimeda, J. Biol. Chem. 268, 27180 (1993); H. M. Lander, J. S. Ogiste, S. F. Pearce, R. Levi, A. Novogrodsky, ibid. 270, 7017 (1995); J. S. Stamler, Cell 78, 931 (1994); A. Hausladen, C. T. Privalle, T. Keng, J. DeAngelo, J. S. Stamler, ibid. 86, 719 (1996); D. Nikitovic, A. Holmgren, G. Spyrou, Biochem. Biophys. Res. Commun. 242, 109 (1998); H. S. So et al., ibid. 247, 809 (1998); L. Xu, J. P. Eu, G. Meissner, J. S. Stamler, Science 279, 234 (1998); H. Y. Yun, M. Gonzalez-Zulueta, V. L. Dawson, T. M. Dawson, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 95, 5773 (1998); Z. Li et al., Neuron 20, 1039 (1998); G. M. Buga, L. H. Wei, P. M. Bauer, J. M. Fukuto, L. J. Ignarro, Am. J. Physiol. 275, R1256 (1998); E. Clementi, G. C. Brown, M. Feelisch, S. Moncada, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 95, 7631 (1998); M. Saura et al., Immunity 10, 21 (1999).
33. J. S. Stamler et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 89, 8087 (1992); L. Molina y Vedia et al., J. Biol. Chem. 267, 24929 (1992); J. S. Stamler et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 89, 444 (1992); S. A. Lipton et al., Nature 364, 626 (1993); R. Gopalakrishna, Z. H. Chen, U. Gundimeda, J. Biol. Chem. 268, 27180 (1993); H. M. Lander, J. S. Ogiste, S. F. Pearce, R. Levi, A. Novogrodsky, ibid. 270, 7017 (1995); J. S. Stamler, Cell 78, 931 (1994); A. Hausladen, C. T. Privalle, T. Keng, J. DeAngelo, J. S. Stamler, ibid. 86, 719 (1996); D. Nikitovic, A. Holmgren, G. Spyrou, Biochem. Biophys. Res. Commun. 242, 109 (1998); H. S. So et al., ibid. 247, 809 (1998); L. Xu, J. P. Eu, G. Meissner, J. S. Stamler, Science 279, 234 (1998); H. Y. Yun, M. Gonzalez-Zulueta, V. L. Dawson, T. M. Dawson, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 95, 5773 (1998); Z. Li et al., Neuron 20, 1039 (1998); G. M. Buga, L. H. Wei, P. M. Bauer, J. M. Fukuto, L. J. Ignarro, Am. J. Physiol. 275, R1256 (1998); E. Clementi, G. C. Brown, M. Feelisch, S. Moncada, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 95, 7631 (1998); M. Saura et al., Immunity 10, 21 (1999).
34. J. S. Stamler et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 89, 8087 (1992); L. Molina y Vedia et al., J. Biol. Chem. 267, 24929 (1992); J. S. Stamler et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 89, 444 (1992); S. A. Lipton et al., Nature 364, 626 (1993); R. Gopalakrishna, Z. H. Chen, U. Gundimeda, J. Biol. Chem. 268, 27180 (1993); H. M. Lander, J. S. Ogiste, S. F. Pearce, R. Levi, A. Novogrodsky, ibid. 270, 7017 (1995); J. S. Stamler, Cell 78, 931 (1994); A. Hausladen, C. T. Privalle, T. Keng, J. DeAngelo, J. S. Stamler, ibid. 86, 719 (1996); D. Nikitovic, A. Holmgren, G. Spyrou, Biochem. Biophys. Res. Commun. 242, 109 (1998); H. S. So et al., ibid. 247, 809 (1998); L. Xu, J. P. Eu, G. Meissner, J. S. Stamler, Science 279, 234 (1998); H. Y. Yun, M. Gonzalez-Zulueta, V. L. Dawson, T. M. Dawson, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 95, 5773 (1998); Z. Li et al., Neuron 20, 1039 (1998); G. M. Buga, L. H. Wei, P. M. Bauer, J. M. Fukuto, L. J. Ignarro, Am. J. Physiol. 275, R1256 (1998); E. Clementi, G. C. Brown, M. Feelisch, S. Moncada, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 95, 7631 (1998); M. Saura et al., Immunity 10, 21 (1999).
35. J. S. Stamler et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 89, 8087 (1992); L. Molina y Vedia et al., J. Biol. Chem. 267, 24929 (1992); J. S. Stamler et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 89, 444 (1992); S. A. Lipton et al., Nature 364, 626 (1993); R. Gopalakrishna, Z. H. Chen, U. Gundimeda, J. Biol. Chem. 268, 27180 (1993); H. M. Lander, J. S. Ogiste, S. F. Pearce, R. Levi, A. Novogrodsky, ibid. 270, 7017 (1995); J. S. Stamler, Cell 78, 931 (1994); A. Hausladen, C. T. Privalle, T. Keng, J. DeAngelo, J. S. Stamler, ibid. 86, 719 (1996); D. Nikitovic, A. Holmgren, G. Spyrou, Biochem. Biophys. Res. Commun. 242, 109 (1998); H. S. So et al., ibid. 247, 809 (1998); L. Xu, J. P. Eu, G. Meissner, J. S. Stamler, Science 279, 234 (1998); H. Y. Yun, M. Gonzalez-Zulueta, V. L. Dawson, T. M. Dawson, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 95, 5773 (1998); Z. Li et al., Neuron 20, 1039 (1998); G. M. Buga, L. H. Wei, P. M. Bauer, J. M. Fukuto, L. J. Ignarro, Am. J. Physiol. 275, R1256 (1998); E. Clementi, G. C. Brown, M. Feelisch, S. Moncada, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 95, 7631 (1998); M. Saura et al., Immunity 10, 21 (1999).
36. J. S. Stamler et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 89, 8087 (1992); L. Molina y Vedia et al., J. Biol. Chem. 267, 24929 (1992); J. S. Stamler et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 89, 444 (1992); S. A. Lipton et al., Nature 364, 626 (1993); R. Gopalakrishna, Z. H. Chen, U. Gundimeda, J. Biol. Chem. 268, 27180 (1993); H. M. Lander, J. S. Ogiste, S. F. Pearce, R. Levi, A. Novogrodsky, ibid. 270, 7017 (1995); J. S. Stamler, Cell 78, 931 (1994); A. Hausladen, C. T. Privalle, T. Keng, J. DeAngelo, J. S. Stamler, ibid. 86, 719 (1996); D. Nikitovic, A. Holmgren, G. Spyrou, Biochem. Biophys. Res. Commun. 242, 109 (1998); H. S. So et al., ibid. 247, 809 (1998); L. Xu, J. P. Eu, G. Meissner, J. S. Stamler, Science 279, 234 (1998); H. Y. Yun, M. Gonzalez-Zulueta, V. L. Dawson, T. M. Dawson, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 95, 5773 (1998); Z. Li et al., Neuron 20, 1039 (1998); G. M. Buga, L. H. Wei, P. M. Bauer, J. M. Fukuto, L. J. Ignarro, Am. J. Physiol. 275, R1256 (1998); E. Clementi, G. C. Brown, M. Feelisch, S. Moncada, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 95, 7631 (1998); M. Saura et al., Immunity 10, 21 (1999).
37. J. S. Stamler et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 89, 8087 (1992); L. Molina y Vedia et al., J. Biol. Chem. 267, 24929 (1992); J. S. Stamler et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 89, 444 (1992); S. A. Lipton et al., Nature 364, 626 (1993); R. Gopalakrishna, Z. H. Chen, U. Gundimeda, J. Biol. Chem. 268, 27180 (1993); H. M. Lander, J. S. Ogiste, S. F. Pearce, R. Levi, A. Novogrodsky, ibid. 270, 7017 (1995); J. S. Stamler, Cell 78, 931 (1994); A. Hausladen, C. T. Privalle, T. Keng, J. DeAngelo, J. S. Stamler, ibid. 86, 719 (1996); D. Nikitovic, A. Holmgren, G. Spyrou, Biochem. Biophys. Res. Commun. 242, 109 (1998); H. S. So et al., ibid. 247, 809 (1998); L. Xu, J. P. Eu, G. Meissner, J. S. Stamler, Science 279, 234 (1998); H. Y. Yun, M. Gonzalez-Zulueta, V. L. Dawson, T. M. Dawson, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 95, 5773 (1998); Z. Li et al., Neuron 20, 1039 (1998); G. M. Buga, L. H. Wei, P. M. Bauer, J. M. Fukuto, L. J. Ignarro, Am. J. Physiol. 275, R1256 (1998); E. Clementi, G. C. Brown, M. Feelisch, S. Moncada, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 95, 7631 (1998); M. Saura et al., Immunity 10, 21 (1999).
38. J. S. Stamler et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 89, 8087 (1992); L. Molina y Vedia et al., J. Biol. Chem. 267, 24929 (1992); J. S. Stamler et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 89, 444 (1992); S. A. Lipton et al., Nature 364, 626 (1993); R. Gopalakrishna, Z. H. Chen, U. Gundimeda, J. Biol. Chem. 268, 27180 (1993); H. M. Lander, J. S. Ogiste, S. F. Pearce, R. Levi, A. Novogrodsky, ibid. 270, 7017 (1995); J. S. Stamler, Cell 78, 931 (1994); A. Hausladen, C. T. Privalle, T. Keng, J. DeAngelo, J. S. Stamler, ibid. 86, 719 (1996); D. Nikitovic, A. Holmgren, G. Spyrou, Biochem. Biophys. Res. Commun. 242, 109 (1998); H. S. So et al., ibid. 247, 809 (1998); L. Xu, J. P. Eu, G. Meissner, J. S. Stamler, Science 279, 234 (1998); H. Y. Yun, M. Gonzalez-Zulueta, V. L. Dawson, T. M. Dawson, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 95, 5773 (1998); Z. Li et al., Neuron 20, 1039 (1998); G. M. Buga, L. H. Wei, P. M. Bauer, J. M. Fukuto, L. J. Ignarro, Am. J. Physiol. 275, R1256 (1998); E. Clementi, G. C. Brown, M. Feelisch, S. Moncada, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 95, 7631 (1998); M. Saura et al., Immunity 10, 21 (1999).
39. J. S. Stamler et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 89, 8087 (1992); L. Molina y Vedia et al., J. Biol. Chem. 267, 24929 (1992); J. S. Stamler et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 89, 444 (1992); S. A. Lipton et al., Nature 364, 626 (1993); R. Gopalakrishna, Z. H. Chen, U. Gundimeda, J. Biol. Chem. 268, 27180 (1993); H. M. Lander, J. S. Ogiste, S. F. Pearce, R. Levi, A. Novogrodsky, ibid. 270, 7017 (1995); J. S. Stamler, Cell 78, 931 (1994); A. Hausladen, C. T. Privalle, T. Keng, J. DeAngelo, J. S. Stamler, ibid. 86, 719 (1996); D. Nikitovic, A. Holmgren, G. Spyrou, Biochem. Biophys. Res. Commun. 242, 109 (1998); H. S. So et al., ibid. 247, 809 (1998); L. Xu, J. P. Eu, G. Meissner, J. S. Stamler, Science 279, 234 (1998); H. Y. Yun, M. Gonzalez-Zulueta, V. L. Dawson, T. M. Dawson, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 95, 5773 (1998); Z. Li et al., Neuron 20, 1039 (1998); G. M. Buga, L. H. Wei, P. M. Bauer, J. M. Fukuto, L. J. Ignarro, Am. J. Physiol. 275, R1256 (1998); E. Clementi, G. C. Brown, M. Feelisch, S. Moncada, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 95, 7631 (1998); M. Saura et al., Immunity 10, 21 (1999).
40. J. S. Stamler et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 89, 8087 (1992); L. Molina y Vedia et al., J. Biol. Chem. 267, 24929 (1992); J. S. Stamler et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 89, 444 (1992); S. A. Lipton et al., Nature 364, 626 (1993); R. Gopalakrishna, Z. H. Chen, U. Gundimeda, J. Biol. Chem. 268, 27180 (1993); H. M. Lander, J. S. Ogiste, S. F. Pearce, R. Levi, A. Novogrodsky, ibid. 270, 7017 (1995); J. S. Stamler, Cell 78, 931 (1994); A. Hausladen, C. T. Privalle, T. Keng, J. DeAngelo, J. S. Stamler, ibid. 86, 719 (1996); D. Nikitovic, A. Holmgren, G. Spyrou, Biochem. Biophys. Res. Commun. 242, 109 (1998); H. S. So et al., ibid. 247, 809 (1998); L. Xu, J. P. Eu, G. Meissner, J. S. Stamler, Science 279, 234 (1998); H. Y. Yun, M. Gonzalez-Zulueta, V. L. Dawson, T. M. Dawson, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 95, 5773 (1998); Z. Li et al., Neuron 20, 1039 (1998); G. M. Buga, L. H. Wei, P. M. Bauer, J. M. Fukuto, L. J. Ignarro, Am. J. Physiol. 275, R1256 (1998); E. Clementi, G. C. Brown, M. Feelisch, S. Moncada, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 95, 7631 (1998); M. Saura et al., Immunity 10, 21 (1999).
41. J. S. Stamler et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 89, 8087 (1992); L. Molina y Vedia et al., J. Biol. Chem. 267, 24929 (1992); J. S. Stamler et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 89, 444 (1992); S. A. Lipton et al., Nature 364, 626 (1993); R. Gopalakrishna, Z. H. Chen, U. Gundimeda, J. Biol. Chem. 268, 27180 (1993); H. M. Lander, J. S. Ogiste, S. F. Pearce, R. Levi, A. Novogrodsky, ibid. 270, 7017 (1995); J. S. Stamler, Cell 78, 931 (1994); A. Hausladen, C. T. Privalle, T. Keng, J. DeAngelo, J. S. Stamler, ibid. 86, 719 (1996); D. Nikitovic, A. Holmgren, G. Spyrou, Biochem. Biophys. Res. Commun. 242, 109 (1998); H. S. So et al., ibid. 247, 809 (1998); L. Xu, J. P. Eu, G. Meissner, J. S. Stamler, Science 279, 234 (1998); H. Y. Yun, M. Gonzalez-Zulueta, V. L. Dawson, T. M. Dawson, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 95, 5773 (1998); Z. Li et al., Neuron 20, 1039 (1998); G. M. Buga, L. H. Wei, P. M. Bauer, J. M. Fukuto, L. J. Ignarro, Am. J. Physiol. 275, R1256 (1998); E. Clementi, G. C. Brown, M. Feelisch, S. Moncada, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 95, 7631 (1998); M. Saura et al., Immunity 10, 21 (1999).
42. J. S. Stamler et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 89, 8087 (1992); L. Molina y Vedia et al., J. Biol. Chem. 267, 24929 (1992); J. S. Stamler et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 89, 444 (1992); S. A. Lipton et al., Nature 364, 626 (1993); R. Gopalakrishna, Z. H. Chen, U. Gundimeda, J. Biol. Chem. 268, 27180 (1993); H. M. Lander, J. S. Ogiste, S. F. Pearce, R. Levi, A. Novogrodsky, ibid. 270, 7017 (1995); J. S. Stamler, Cell 78, 931 (1994); A. Hausladen, C. T. Privalle, T. Keng, J. DeAngelo, J. S. Stamler, ibid. 86, 719 (1996); D. Nikitovic, A. Holmgren, G. Spyrou, Biochem. Biophys. Res. Commun. 242, 109 (1998); H. S. So et al., ibid. 247, 809 (1998); L. Xu, J. P. Eu, G. Meissner, J. S. Stamler, Science 279, 234 (1998); H. Y. Yun, M. Gonzalez-Zulueta, V. L. Dawson, T. M. Dawson, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 95, 5773 (1998); Z. Li et al., Neuron 20, 1039 (1998); G. M. Buga, L. H. Wei, P. M. Bauer, J. M. Fukuto, L. J. Ignarro, Am. J. Physiol. 275, R1256 (1998); E. Clementi, G. C. Brown, M. Feelisch, S. Moncada, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 95, 7631 (1998); M. Saura et al., Immunity 10, 21 (1999).
43. F. Ruiz, F. J. Corrales, C. Miqueo, J. M. Mato, Hepatology 28, 1051 (1998).
44. We thank E. Braunwald, V. Dzau, and R. Finberg for support, and E. Alnemri and G. Salvesen for reagents. Supported by GM57601-01 from the National Institute of General Medicine and a Leukemia Society of America translational research award (J.B.M.), the Amyotrophic Lateral Sclerosis Association (A.G.), and HL52529 and HL59130 from the National Heart, Lung, and Blood Institute (J.S.S.).